Methoden um Proteine zu Reinigen und deren Konzentration zu bestimmen?

Question

Hallo, 
ich suche typische Methoden, die heutzutage im Labor angewendet werden, um Proteine zu Reinigen bzw. zu Isolieren und dessen Konzentration zu bestimmen. 

Ich habe bereits folgende Methoden gefunden, um die Konzentration von Proteine zu bestimmen:
-gravimetrische Analysen (Kjeldahl)
-quantitative Aminosäure-Analysen (Totalhydrolyse, Endgruppenbestimmung oder Edman-Abbau)
-refraktometrische Analysen
-Kolorimetrie
-Spektrophotometrie bei 280 nm
-densidometrische Methoden (aus Proteingelen etc.) nach Bindung eines Farbstoffes
Quelle: http://www.chemgapedia.de/vsengine/vlu/vsc/de/ch/8/bc/vlu/proteinanalytik/proteinreinigung.vlu/Page/vsc/de/ch/8/bc/proteinanalytik/methoden_protein/pr_nachweis.vscml.html

und um die Proteine zu Reinigen:
-Ionenaustauschchromatographie (IEX)
-Isoelektrische Fokussierung (IEF)
-Gelfiltration (Ausschlusschromatographie)
-Affinitätschromatographie
-Hydrophobe Interaktionschromatographie (HIC)
Quelle: http://de.wikipedia.org/wiki/Proteinreinigung

Ich muss darüber einen (wichtigen!) Vortrag halten, hab jedoch "nur" 20-30min Zeit und will mich deshalb jediglich auf die wesentlichen Methoden beschränken, die im Labor hauptsächlich angewendet werden. Deshalb meine Frage, ob mir jemand(am besten begründet) sagen kann, welche von diesen Methoden(oder evtl. eine andere, nicht aufgelistete Methode)im Labor praktiziert werden, um die beschriebenen Resultate zu erreichen.
:)

niemand · Accepted Answer

Das kann man nicht so einfach sagen: Diese Methode ist die beste! Das liegt daran, daß es immer davon abhängt, welche Matrix analysiert werden muß und welche Methode für die entsprechende Anwendung die Beste ist (also z.B. auch wie genau das Ganze sein muß). Was für eine Firma DIE Lösung ist, kann für die andere völlig ungeeignet sein. Ein wichtiger Faktor ist heutzutage Zeit, wobei du dann sehr zeitaufwendige Methoden heute meist vergessen kannst. Eine solche alte zeitfressende Methode ist die Gravimetrie, da sie sehr zeitaufwendig ist und ein Höchstmaß an Sorgfalt benötigt, da sonst die Fehler riesig werden, die man macht. Trotzdem wird´s heute noch gemacht, je nach Problemstellung. Grundsätzlich kann man sagen, alle der genannten Methoden (und die Kapillarelektrophorese - Reinigung und Konzbestimmung) sind gängige Methoden im Labor.

Du mußt zu jeder Methode die wesentlichen Merkmale aufzählen. Funktionsprinzip, Zeitaufwand, Genauigkeit etc. Das ist viel Arbeit, aber wenn der Vortrag wichtig ist, solltest du dir die Zeit nehmen. Leider kann ich dir nicht dabei helfen Zeit zu sparen.

Methoden um Proteine zu Reinigen und deren Konzentration zu bestimmen?

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